2020, Vol. 56
扁平苔癣是一种发生在皮肤、黏膜、指(趾)甲的慢性炎症性皮肤病，主要病理表现为基底细胞液化变性及真皮上部界面炎症反应带。其病因及发病机制目前尚未完全明了。近年来国内外关于口腔扁平苔癣组织中基质金属蛋白酶(MMPs)表达的研究较多，结果认为MMPs作为蛋白酶参与了细胞外基质(ECM)的降解，可能在扁平苔癣基底细胞及基底膜损伤中发挥重要作用[1-3]。作为MMPs的上游调控因子[4]，CD147可诱导MMPs的活化并导致肿瘤的侵袭[5-7]。目前，国内外对于皮肤扁平苔癣中MMP-3、MMP-7、CD147表达的研究不多。本文检测扁平苔癣皮损组织中CD147、MMP-3、MMP-7的表达情况，探讨三者间关系及其临床意义。
1 资料与方法 1.1 研究对象2017年3月—2019年3月，选取我科收治、经组织病理检查确诊为皮肤扁平苔癣病人的组织标本40例，其中男20例，女20例; 年龄22~69岁，平均47.40岁; 病程1月~10年，平均13.9月; 14例取材于躯干，26例取材于四肢; 所有病人均排除其他系统性疾病，均未系统使用糖皮质激素治疗。同期选取我院美容外科手术切除的正常皮肤组织标本30例作为正常对照组，其中男12例，女18例; 年龄为17~70岁，平均32.20岁; 15例取材于躯干，15例取材于四肢; 均排除其他系统性疾病。两组年龄、性别及取材部位差异均无统计学意义。所取标本均经甲醛固定、石蜡包埋、切片。
1.2 主要试剂一抗：包括兔抗人MMP-3多克隆抗体、兔抗人MMP-7多克隆抗体、兔抗人CD147多克隆抗体(均购自北京博奥森生物技术有限公司); 通用型二抗PV-6001、二氨基联苯胺(DAB)试剂、免疫组化笔(北京中杉金桥公司)。
1.3 实验方法将标本切片置于64 ℃的烤片机上60 min后, 经脱蜡、抗原修复、体积分数0.03过氧化氢阻断内源性过氧化物酶、加一抗(CD147、MMP-3、MMP-7，滴度分别为1:300、1:150、1:150)、加二抗PV-6001、DAB显色、苏木精复染、脱水、中性树胶封片等步骤，光镜下观察染色情况。
1.4 结果判断CD147、MMP-3、MMP-7阳性细胞染色淡黄色至棕褐色。光镜下，每张切片随机选取5个视野，每个视野计数100个细胞。染色结果依据半定量法进行判断。染色强度评分：基本不着色0分，淡黄色为1分，棕褐色为2分; 阳性细胞百分比评分：< 5%为0分，5%~25%为1分，26%~50%为2分，>50%为3分。以细胞染色强度与阳性细胞百分比评分的乘积判定结果：0~1分为阴性，2~3分为阳性，4分及其以上为强阳性，分别用(－)、(+)、(╫)表示。
1.5 统计学处理采用SPSS 24.0软件进行统计学处理，计数资料组间比较均采用曼-惠特尼秩和检验，相关分析采用Spearman法。P < 0.05为差异有统计学意义。
2 结果扁平苔癣皮损组织中CD147阳性染色主要表现为表皮基底层、棘层、颗粒层细胞膜和细胞浆出现棕黄色颗粒，而正常对照组表皮基底层、棘层及颗粒层浅着色。扁平苔癣皮损组织中MMP-3阳性染色主要表现为表皮基底层细胞浆出现棕黄色颗粒，正常对照组表皮基底层细胞浆亦出现MMP-3阳性染色。扁平苔癣皮损组织MMP-7阳性染色表现为表皮基底层、棘层及颗粒层细胞浆和(或)细胞核均出现棕黄色颗粒，而正常对照组表皮基底层、棘层及颗粒层浅着色(图 1)。扁平苔癣组CD147、MMP-7表达高于正常对照组，差异具有显著意义(Z=－3.267、－2.331，P < 0.05);两组MMP-3表达差异无显著性(P>0.05)。见表 1。Spearman相关分析显示，扁平苔癣皮损组织中MMP-7与CD147表达呈正相关(r=0.587, P < 0.05)。
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| A、B、C分别为正常皮肤组织CD147、MMP-3、MMP-7的表达(SP染色，400倍); D、E、F分别为扁平苔癣皮损组织CD147、MMP-3、MMP-7的表达(SP染色，400倍)。 图 1 正常皮肤与扁平苔藓皮损中CD147、MMP-3、MMP-7的表达 |
| 表 1 正常皮肤与扁平苔癣皮损组织中CD147、MMP-3、MMP-7表达比较(例) |
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MMPs属于锌依赖性内肽酶家族，能够降解ECM的多种成分[8-10]，正常表达水平的MMPs参与生长发育过程中ECM的重构以及细胞的增殖、迁移和黏附等，参与机体多种生理功能的调控; 而MMPs的异常表达往往与炎症、肿瘤以及心血管疾病有关[11-14]。既往研究显示，MMP-2、MMP-9与扁平苔癣的发病机制相关[15-18]。作为MMPs家族的重要成员，MMP-3、MMP-7是否参与了扁平苔癣发病尚不清楚。MMP-3能够降解Ⅲ、Ⅳ、Ⅴ型胶原及纤连蛋白、蛋白聚糖、层粘连蛋白、明胶等，不仅在破坏细胞间桥、导致细胞凋亡中发挥重要作用，还能激活前体MMP-1、前体MMP-9[19]。有研究结果显示，MMP-3表达上调与口腔扁平苔癣的发病机制相关[20-21]; 其表达水平与口腔扁平苔癣的严重程度有关[22]，但其与皮肤扁平苔癣严重程度是否相关有待进一步研究。GUNDUZ等[1]研究显示，扁平苔癣皮损组织中MMP-2、MMP-3及纤连蛋白表达缺失，而正常皮肤组织上述因子尤其是MMP-3均有表达，主要表达在基底细胞层，认为上述因子表达缺失与扁平苔癣皮损组织炎症反应有关。本文研究结果显示，皮肤扁平苔癣中MMP-3表达虽有上调，但与对照组比较差异无统计学意义。分析其原因可能为：皮肤扁平苔癣与口腔扁平苔癣发病机制可能存在差异，或与研究样本量大小、染色方法及判断标准不同有关，其具体原因有待大样本研究进一步证实。
MMP-7也属于MMPs家族中重要的成员之一，是上皮特异性产物，有较强降解Ⅳ胶原的作用，并与上皮细胞凋亡相关。有研究表明，MMP-3与MMP-7在正常口腔黏膜、口腔扁平苔癣及口腔鳞癌中的表达逐渐增高，MMP-3、MMP-7在侵袭过程中表达上调，与侵袭性相关[23-25]。这或许为甄别口腔扁平苔癣的恶变提供了可能。还有研究显示，口腔扁平苔癣口腔黏膜上皮与结缔组织MMP-7的表达高于正常口腔黏膜[23]，MMP-7与组织金属蛋白酶抑制剂(TIMPs)的比值高于对照组[24]，认为MMP-7及MMP-7/TIMP的表达失调可能参与了口腔扁平苔癣的发病。本文研究显示，MMP-7在扁平苔癣皮损组织的基底层、棘层及颗粒层均有表达，并且MMP-7的表达明显高于正常对照组，表明MMP-7可能在扁平苔癣发病中发挥重要作用。
CD147又称细胞外基质金属蛋白酶诱导因子，是一种跨膜蛋白，属于免疫球蛋白家族，最初从恶性肿瘤细胞的质膜中分离得到[26]，主要表达于肿瘤细胞、表皮细胞、免疫细胞、内皮细胞等[27]，可诱导多种MMPs的活化，包括MMP-2、MMP-3、MMP-7及MMP-9等[5]，在肿瘤进展中起重要作用[28-29]。有研究结果表明，CD147能刺激MMPs的分泌，但对TIMPs并不产生影响，导致MMPs与TIMPs的失衡，从而导致基底膜与肿瘤外基质的降解，引起肿瘤的侵犯与转移[30]。一项对于甲状腺滤泡癌(FTC)的研究显示，CD147、MMP-3、MMP-7、MMP-9在人FTC组织中表达上调，并且培养的PTC-131细胞中MMP-3、MMP-7、MMP-9的表达依赖于CD147的调节[5]。本文研究结果显示，与正常对照组比较，扁平苔癣皮损组织中MMP-3的表达差异无统计学意义，MMP-7、CD147表达上调，且MMP-7、CD147表达呈正相关，推测CD147可能通过诱导MMP-7的活化，促进其分泌而协同参与扁平苔癣的发病，其具体作用机制有待于进一步研究。
综上所述，扁平苔癣皮损组织中的CD147及MMP-7表达上调，且两者表达呈正相关，提示两者在扁平苔癣发病中可能发挥重要作用，至于两者是否直接导致扁平苔癣的发病需进一步研究证实。
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